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折叠滤芯微滤膜酶活性的测定

时间:2018-10-12 11:31 点击量:

折叠滤芯微滤膜酶活性的测定
常常利用同位素示踪法来测定参与生物高分子合成的酶活性,即利用标记小分了底物和酶保温,然后把放射性的小发子(底物) 和放射性大分子(产物)分开。这一般用酸或有机溶剂沉淀来完成(沉淀蛋白质一般用三氯醋酸,沉淀核酸常用过氯酸)。这里在,用微孔 滤膜过滤可以简便快速地把沉淀产物完全收集在滤膜上,然后充分洗涤除去未掺入的小分子放射性底物,最后干燥滤膜,直接溶于闪烁 液中进行均相测定或悬浮在闪烁液中进行非均相测定。 降解大分子的酶也可以用微孔滤膜技术来测定活性。例如测定DNA内切酶活性时,用酸沉淀法不够满意,因为产物中也包括较大分子的 寡核苷酸,而它也和酸不溶性底物一起沉淀出来,为了精确测定核酸内切酶活性,酶反应混合物直接用Schleicher&Schuell厂生产的A 型硝酸纤维素酯滤膜过滤,它只滞留大分子而不滞留寡核苷酸,能把产物和底物分离得比较彻底,结果是比较满意的。
在原则上,凡是能把一种放射性前体转移或掺入到一种能选择性沉淀形式产物的酶中,都能用微孔滤膜技术测定活性。
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